熒光強(qiáng)度容易受外界因素的影響，如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì)、表面活性劑等都會(huì)造成熒光強(qiáng)度的變化。嚴(yán)格控制測(cè)試條件對(duì)熒光分析來說至關(guān)重要。
①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
②在熒光分析時(shí)，為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對(duì)某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長波長、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照。
③溫度變化可引起熒光強(qiáng)度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產(chǎn)率，熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大，測(cè)試溫度變化不超過±3℃，對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎無影響。
④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí)，溶液的pH對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例：在pH=7～12的溶液中會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色熒光，在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如，維生素B2（核黃素）在430～440nm藍(lán)光照射下會(huì)發(fā)出綠色熒光，λem為535nm。它在pH=6～7的溶液中熒光強(qiáng)度大，而在pH=11時(shí)熒光消失；但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會(huì)生成熒光強(qiáng)度比維生素B2強(qiáng)得多的黃光素，并可溶于。利用此性質(zhì)可提高測(cè)定的靈敏度和選擇性。
⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強(qiáng)。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度。
